Методы диагностики H.pylori

Диагностика H. pylori является важным этапом для выявления наличия данной бактерии в организме. Бактерия хелиобатер является причиной специфического вида гастрита, что значительно усложняет жизнь пациенту. Кроме того, заражение H. pylori представляет опасность не только для самого больного, но и для окружающих, так как бактерия может передаваться различными путями. На веб-сайте arstom2.ru вы можете ознакомиться с различными методами диагностики h pylori. Компетентное проведение исследования является важной составляющей успешного лечения гастрита.

Общая информация об исследовании

H. pylori – это микроорганизм, который является грамотрицательным и факультативно-анаэробным. Он способен заражать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. В большинстве случаев инфицирование H. pylori (геликобактериоз, или хеликобактериоз) является постоянным и хроническим. Геликобактериоз очень распространен: бактерия H. pylori может быть обнаружена у половины населения планеты. Однако H. pylori-ассоциированные заболевания (гастрит, язва желудка или двенадцатиперстной кишки, аденокарцинома желудка, MALT-лимфома) развиваются только у 15-20 % зараженных пациентов. Важно отметить, что эти заболевания имеют благоприятный прогноз, если они диагностируются рано и H. pylori полностью удаляется. Лабораторные методы исследования играют важную роль в диагностике геликобактериоза.

Общая информация о методах исследования H. pylori

Существует несколько способов обнаружения H. pylori. Прямые методы позволяют непосредственно обнаружить сам микроорганизм. Для большинства прямых методов требуется образец ткани слизистой оболочки (биоптат) и/или содержимое желудка и двенадцатиперстной кишки (аспират), которые обычно получают во время эндоскопического исследования. Таким образом, прямые методы исследования, как правило, являются инвазивными. В отличие от этого, непрямые методы обнаруживают не сам микроорганизм, а косвенные признаки инфекции, такие как специфические антитела в сыворотке крови (серологические тесты) или содержание меченого атома углерода в выдыхаемом воздухе (дыхательный уреазный тест). Поскольку для проведения непрямых тестов не требуется эндоскопического исследования, они называются неинвазивными. Как прямые, так и непрямые тесты на H. pylori имеют свои преимущества и недостатки. Для точной диагностики геликобактериоза требуется проведение нескольких тестов одновременно. Поэтому особенно удобным для врача и пациента является комплексный анализ, включающий все необходимые тесты на H. pylori.

Один из самых чувствительных методов обнаружения H. pylori – это полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). РТ-ПЦР – это метод молекулярной диагностики, который позволяет обнаружить фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции в биологическом материале (например, в образце ткани). Благодаря возможности обнаружения генетического материала, РТ-ПЦР позволяет обнаруживать любые формы H. pylori (не только активные спиралевидные, но и неактивные кокковые, некультивируемые), что делает этот метод очень чувствительным и превосходящим метод бактериологического посева.

Теоретически для проведения РТ-ПЦР достаточно наличие 1 молекулы ДНК. На практике концентрация возбудителя в образце должна составлять около 10-100 КОЕ/мл. Такая высокая чувствительность теста означает, что получение отрицательного результата исследования позволяет исключить H. pylori в качестве причины заболевания. Это имеет важное значение при дифференциальной диагностике НПВС-ассоциированных, стрессовых и ишемических гастритов и язв.

Следует отметить, что несмотря на очень высокую чувствительность теста (85-98%), возможны ложноотрицательные результаты. Например, ложноотрицательный результат может быть получен, если бактериальная нагрузка очень низкая (например, на фоне приема некоторых антибиотиков). Чтобы избежать ошибок диагностики, рекомендуется комбинировать этот прямой тест с серологическими исследованиями.

Инфицирование H. pylori сопровождается значительным увеличением иммуноглобулинов класса IgG и IgA в сыворотке крови. Эти антитела определяются в крови с помощью непрямых тестов. IgG обнаруживаются в 95-100% случаев геликобактериоза, а IgA – в 68-80%. Исследование позволяет определить титр антител, то есть является количественным. Обычно высокие титры антител характерны для активной, текущей инфекции. Однако следует отметить, что нет четкой связи между титром антител и степенью тяжести инфекции.

Серологические тесты, так же как и метод РТ-ПЦР, имеют некоторые ограничения. Результат анализа зависит от особенностей иммунного ответа пациента. Пациенты, принимающие цитостатические препараты, и пожилые люди имеют пониженную выработку специфических антител (включая антитела к H. pylori). Поэтому для избежания диагностических ошибок рекомендуется дополнять серологические тесты прямыми тестами. Это учтено при создании комплексного анализа на H. pylori.

Таким образом, комплексный анализ на H. pylori – это комбинация необходимых и достаточных тестов для обнаружения этого микроорганизма. Комплексный анализ не предназначен для контроля лечения. Результаты как РТ-ПЦР, так и исследования иммуноглобулинов IgG и IgA останутся положительными даже после полной эрадикации H. pylori. Ложноположительный результат РТ-ПЦР в этом случае связан с возможностью обнаружения ДНК любых, даже разрушенных микроорганизмов, а ложноположительный результат серологических тестов – с особенностями динамики иммунного ответа.

Бактериологический метод

Метод основан на определении возбудителя путем выращивания из образца СОЖ. Полученные при эндоскопии образцы помещают в пробирки с транспортными средами (Cary-Blaer или Pylori-средой). Выращивание материала рекомендуется проводить в тот же день, когда он поступает в лабораторию. Выращивание происходит в условиях с низким содержанием кислорода (≤5%). После этого проводится идентификация полученных культур, определяются их внешние и структурные особенности, а также их чувствительность к антибиотикам.

Метод имеет специфичность 98% и чувствительность 76-90% [16], по другим данным – 50-90% [17]. Однако, возможны ложноотрицательные результаты при неправильном выполнении или неточном соблюдении методики исследования. Несмотря на высокую точность метода, он редко используется в обычной клинической практике из-за длительности анализа (в среднем 7 дней), сложности его проведения и высокой стоимости. Метод рекомендуется применять после двух неудачных курсов эрадикационной терапии, когда выбор антибиотиков зависит от чувствительности возбудителя к ним [10, 13].

Виды анализа на хеликобактер пилори

Выявить наличие хитроумной бактерии в организме можно различными способами.

Анализ кала

Этот анализ является качественным, то есть позволяет определить, есть ли хеликобактер пилори в организме или нет. Исследование проводится в лаборатории с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Анализ отличается высокой точностью — до 95%. Данный анализ является самым простым способом диагностики. Его рекомендуют детям, пожилым людям и пациентам с тяжелыми заболеваниями.

Анализ крови

• Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген хеликобактер пилори в организме вызывает иммунную реакцию — выработку антител, или иммуноглобулинов. Данный анализ, также как и анализ кала, является качественным. В качестве биоматериала используется венозная кровь. Помимо описанных выше симптомов и состояний, этот анализ также назначается в качестве профилактического обследования для лиц, контактировавших с больными желудочно-кишечными заболеваниями.
• Метод вестерн-блота. Данное исследование проводится, если у пациента обнаружены антитела к хеликобактер пилори. Этот анализ является более специфичным методом диагностики, так как предоставляет подробную информацию об антителах. Точность определения количества антител достигается путем разделения белков экстракта бактерии с помощью электрофореза. Для исследования используется венозная кровь.

Гистологический метод

Несмотря на высокую чувствительность гистологического метода, на его точность диагностики могут влиять количество биоптатов и место их взятия. Для получения наиболее полной информации рекомендуется проведение множественной биопсии, которая также позволяет оценить структуру и состояние желудочно-кишечного тракта [19]. Сиднейская система рекомендует взять не менее пяти биоптатов: два из антрального отдела (2–3 см от привратника по большой и малой кривизне), два из тела желудка (по большой и малой кривизне, примерно в 8 см от кардии) и один из угла желудка. Значимость исследования повышается при оценке степени и стадии гастрита по системе OLGA или OLGIM, которые позволяют сделать прогноз развития заболевания [20].

Следует учитывать, что обнаружить новообразования удается только на тонких и хорошо окрашенных срезах. При наличии атрофических изменений в желудке увеличивается вероятность получения ложноотрицательных результатов. Кроме того, в области кишечной метаплазии новообразования в большинстве случаев не обнаруживаются ни при обычных, ни при специальных методах окрашивания, несмотря на наличие серологических признаков инфекции. Исчезновение новообразований связано с развитием кишечной метаплазии и снижением выработки желудочного сока [22]. У пациентов, принимающих препараты, снижающие кислотность желудка (H2-блокаторы, ингибиторы протонной помпы), препараты висмута и антибиотики, чувствительность и точность генетической модификации снижены [19, 22]. Рекомендуется прекратить прием ингибиторов протонной помпы за 2 недели до проведения исследования, антибиотиков и препаратов висмута – за 30 дней [23].

Цитологический метод является одним из вариантов гистологического исследования. Материалом для анализа являются мазки-отпечатки биоптатов желудка, взятых при эндоскопическом исследовании, которые после высушивания окрашиваются по методу Романовского–Гимзы.

Быстрый уреазный тест

Быстрый уреазный тест (БУТ) – это метод диагностики инфекции Helicobacter pylori (НР), основанный на обнаружении активности уреазы бактерии. Для проведения теста необходимо взять образец слизистой оболочки желудка, который помещается в пробирку с мочевиной и индикатором на жидкой, гелевой или сухой основе. Изменение цвета индикатора при повышении pH среды в результате разложения мочевины микробной уреазой позволяет с высокой точностью определить наличие инфекции Helicobacter pylori. В клинической практике, если есть показания для эндоскопии и нет противопоказаний для биопсии, БУТ рекомендуется использовать в качестве первого диагностического метода [24].

Чувствительность БУТ зависит от количества взятых образцов и может варьировать от 80% до 90% [26] (по другим данным – от 61% до 74% [27]). Увеличение количества образцов, взятых из разных частей желудка (тела и антрума), позволяет повысить чувствительность БУТ [28]. При использовании качественных тестов и нескольких биоптатов, а также хорошей обработке биопсийных щипцов, специфичность теста может достигать 95% – 100% [25, 26] (по другим данным – 90% [17]). Ложноположительные результаты редко наблюдаются и могут быть вызваны наличием других бактерий, содержащих уреазу, таких как Proteus mirabilis, Citrobacter freundii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae и Staphylococcus aureus. Ложноотрицательные результаты теста чаще встречаются, чем ложноположительные, поэтому отрицательный результат не исключает наличие инфекции Helicobacter pylori [10]. Ложноотрицательные результаты могут быть получены у пациентов, перенесших язвенное кровотечение, при приеме ингибиторов протонной помпы, антибиотиков, препаратов висмута, а также при выраженной атрофии или метаплазии слизистой оболочки желудка [29].

Таким образом, положительный результат БУТ указывает на наличие инфекции Helicobacter pylori и позволяет назначить лечение, но отрицательный результат не исключает наличие инфекции, поэтому БУТ не рекомендуется для оценки эффективности эрадикации [10].

13С/14С-уреазный дыхательный тест

УДТ также основан на обнаружении уреазной активности НР. При наличии НР происходит гидролиз мочевины, содержащей изотоп углерода (13C или 14C), принятой внутрь. Углекислый газ (13CO2 или 14CO2) попадает в кровь и в конечном итоге выделяется через легкие при выдохе. Пробы воздуха берутся до приема тестового раствора и через определенное время (при использовании 13C-мочевины – через 30 минут). Прирост меченого CO2 выражается как изменение по сравнению с исходным значением (DOB). Обычно для определения наличия инфекции HР используется значение DOB > 2,0‰. Исследования показали, что значение DOB положительно коррелирует с количеством бактерий HР [30]. Чувствительность 13C-УДТ составляет 96%, а специфичность – 93% [31].

Изначально УДТ был разработан с использованием мочевины, содержащей слабо радиоактивный изотоп 14С, однако в настоящее время он практически полностью заменен на тест с мочевиной, содержащей стабильный не радиоактивный изотоп 13С [31]. 13C-УДТ предпочтительнее 14C-УДТ, так как он позволяет избежать даже минимального воздействия радиации. Однако в развивающихся странах 14C-УДТ все еще популярен из-за его более низкой стоимости. Точность диагностики 13C-УДТ и 14C-УДТ не отличается, и оба теста считаются "золотым стандартом" среди неинвазивных методов диагностики HР [32]. Ложноположительные результаты редки, но могут возникать после проведения эндоскопического исследования с биопсией непосредственно перед тестом, у пациентов, которым делали резекцию желудка, а также при снижении секреции желудка.

Небольшое количество ложноотрицательных результатов может быть связано с нарушением методики взятия и хранения проб выдыхаемого воздуха, физической нагрузкой перед и во время проведения теста. Как и при большинстве других тестов, достоверный результат УДТ можно получить только после 2-недельного прекращения приема ингибиторов протонной помпы и не ранее чем через 4 недели после отмены антибиотиков и препаратов висмута. Согласно Маастрихтскому консенсусу V, УДТ с мочевиной является лучшим методом диагностики HР с высокой чувствительностью и специфичностью, а также отличной производительностью как для первичной диагностики инфекции, так и для оценки эффективности эрадикации [10].

В России широко используется дыхательный тест с немеченой мочевиной («Хелик-тест»). Результаты многоцентрового исследования эффективности дыхательных тестов показали его недостаточную чувствительность (78%) и низкую специфичность (62%) [33]. Авторы другого исследования «Хелик-теста» отметили, что низкая специфичность NH3-уреазных тестов и, как следствие, высокая частота ложноположительных результатов не позволяют использовать их для первичной диагностики инфекции и контроля эффективности эрадикации HР [34].

Исследование кала на наличие антигена НР

Анализ стула на антиген HР (АГ HР) – это другой метод диагностики, который не требует инвазивных процедур и обладает высокой чувствительностью (94%) и специфичностью (97%) [35]. Существуют два варианта этого исследования: иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунохроматографический анализ (ИХА), использующие поликлональные (ПА) или моноклональные (МА) антитела. Тесты, основанные на моноклональных антителах, обладают большей точностью, а ИФА предоставляют более надежные результаты, чем ИХА [35].

Вместе с 13С-УДТ, моноклональный тест на основе ИФА рекомендуется как для первичной диагностики инфекции HР, так и для контроля эрадикации [10]. Моноклональный антиген в стуле является удобным и эффективным тестом для диагностики инфекции HР у детей [36, 37]. Кроме того, исследование антигена HР может быть использовано для эпидемиологических исследований и программ скрининга, так как оно относительно недорогое и не требует сложного оборудования [21]. Ложноотрицательные результаты могут быть вызваны неравномерным распределением антигена в стуле, разрушением антигена при замедлении процесса эвакуации стула (запоры) или кровотечением в желудочно-кишечном тракте [37].

Серологический метод – выявление антител IgG к HР в плазме крови

Возрастает интерес к расширению возможностей обнаружения инфекции Helicobacter pylori (НР) в режиме реального времени во время эндоскопического обследования желудка, что поможет снизить затраты на диагностику и лечение. Исследование в узкоспектральном режиме открыло новые перспективы для диагностики не только предраковых заболеваний желудка, но и НР-инфекции. Узкоспектральная визуализация (linked color imaging – LCI) – это новый метод визуальной эндоскопии, разработанный в Токио, который основан на использовании узкополосного коротковолнового света. Это позволяет обнаружить воспаление, атрофию и предраковые изменения в слизистой оболочке желудка.

Измененный дыхательный тест 13С на helicobacter pylori

Дыхательный тест 13С на helicobacter pylori является методом диагностики и контроля хода лечения, который не требует инвазивных процедур. Ранее использовавшиеся методы диагностики ограничивались определением антител к helicobacter pylori, обнаружением бактерии в кале или биоптате. Однако скрининг методом иммуноферментного анализа (EIA) для выявления антител к helicobacter pylori неэффективен при недавнем заражении, когда антитела еще не образовались. Кроме того, этот метод не подходит для контроля эрадикации, так как антитела сохраняются в организме длительное время.

Выявление helicobacter pylori в кале также имеет недостатки, связанные с зависимостью от консистенции стула, что может привести к значительным колебаниям в количестве антител. Кроме того, анализ кала на наличие helicobacter pylori не подходит для текущего контроля хода лечения. Инвазивная эндоскопическая диагностика является неприятной для пациента и сопряжена с риском кровотечения. Кроме того, результаты этого метода не всегда достоверны, так как распределение helicobacter pylori по слизистой оболочке желудка может быть неравномерным. В связи с этим, для повышения достоверности исследования, биоптаты берутся из разных участков слизистой оболочки.

Дыхательный тест с использованием изотопа мочевины 13C позволяет проводить неинвазивную первичную диагностику и контроль хода лечения. После приема изотопа мочевины 13С, бактериальная уреаза начинает его разложение на изотоп диоксида углерода 13С и аммиак. Изотоп 13С не является радиоактивным, поэтому он полностью безопасен для человека. Тест можно использовать без ограничений при обследовании беременных женщин.

Ход тестирования

1. Пациент выдыхает воздух в специальный пакет (нулевая проба).
2. Пациент проглатывает 50 мг мочевины, содержащей изотоп 13C (таблетки Diabact Urea Breath Test), запивая ее 50–100 мл воды, не разжевывая таблетку.
3. Через 10 минут пациент снова выдыхает воздух во второй пакет.

Совет: Рекомендуется провести текущую оценку эффективности лечения через 4–6 недель. Прием антибиотиков и препаратов висмута следует прекратить за 28 дней, а ингибиторов протонной помпы – за 14 дней до проведения исследования.

Частые вопросы

Какие методы используются для диагностики H.pylori?

Для диагностики H.pylori используются различные методы, включая:

• Дыхательный тест с углеродом-13. Пациенту предлагается выпить раствор с углеродом-13, который будет метаболизироваться H.pylori, если она присутствует в желудке. Затем пациент выдыхает в специальный прибор, который анализирует содержание углерода-13 и позволяет определить наличие инфекции.
• Кровь тест. При этом тесте анализируются антитела к H.pylori в крови пациента. Положительный результат указывает на наличие инфекции.
• Гастроскопия с биопсией. Во время гастроскопии врач берет образцы тканей из желудка для последующего исследования на наличие H.pylori. Этот метод считается наиболее точным.

Какой метод диагностики H.pylori является наиболее точным?

Наиболее точным методом диагностики H.pylori считается гастроскопия с биопсией. Во время этой процедуры врач берет образцы тканей из желудка и отправляет их на лабораторное исследование. Там проводится анализ на наличие H.pylori, что позволяет точно определить наличие или отсутствие инфекции.

Какие преимущества имеет дыхательный тест с углеродом-13 для диагностики H.pylori?

Дыхательный тест с углеродом-13 имеет несколько преимуществ:

• Неинвазивность. Для проведения теста не требуется вмешательства внутрь организма пациента, что делает его безопасным и комфортным.
• Высокая точность. Дыхательный тест с углеродом-13 имеет высокую чувствительность и специфичность, что позволяет достоверно определить наличие H.pylori.
• Простота проведения. Пациенту предлагается выпить раствор с углеродом-13 и выдохнуть в специальный прибор, что занимает всего несколько минут.

Полезные советы

СОВЕТ №1

Обратитесь к врачу и пройдите специальные тесты для диагностики H.pylori. Это может быть кровь, стул или дыхательный тест. Только профессиональный врач может точно определить наличие инфекции.

СОВЕТ №2

Изучите свои симптомы. Характерные признаки инфекции H.pylori могут включать боли в желудке, изжогу, тошноту, рвоту, утрату аппетита и необъяснимую потерю веса. Если у вас есть подозрения, обратитесь к врачу для дальнейшей диагностики.

СОВЕТ №3

Избегайте употребления некоторых лекарственных препаратов перед тестированием на H.pylori. Некоторые антибиотики и препараты, содержащие бизмут, могут искажать результаты тестов. Поэтому перед прохождением тестов следуйте указаниям врача и сообщите ему о всех принимаемых вами лекарствах.